Le système de chromatographie de séparation par chromatographie liquide à basse pression s'applique à la recherche et à la préparation dans des industries telles que la biochimie, la chimie de synthèse, les produits naturels, le développement de médicaments, la chimie alimentaire, la chimie agricole, les cosmétiques, les polymères et la pétrochimie. Peut effectuer la chromatographie d'échange d'ions, la chromatographie de filtration de gel de chromatographie d'affinité, la chromatographie d'action hydrophobe et d'autres méthodes pour l'analyse de séparation, la détection de flux de protéines, d'enzymes, d'acides nucléiques, de nucléotides, de Polypeptides, (avec / sans acides aminés aromatiques) et D'autres échantillons biologiques / non biologiques avec absorption UV, est idéal pour la purification de biomolécules, il est polyvalent, facile à utiliser et économique. Conception compacte pour maximiser les économies d'espace dans les chambres froides et les laboratoires.

Remarques

Les exigences techniques du détecteur UV à double faisceau haute performance dans la configuration du système sont utilisées pour l'essai quantitatif des médicaments dans les usines pharmaceutiques du pays. Caractéristiques de l'équipement de l'instrument

Détermination de la double longueur d'onde de la protéine 280nm / 254nm

Acides aminés aromatiques tels que la tyrosine, le tryptophane, qui contiennent des doubles liaisons conjuguées dans les molécules de protéines. Ils ont la propriété d'absorber la lumière ultraviolette, dont le pic d'absorption est à la longueur d'onde de 280 nm, et la valeur de densité optique du pic d'absorption dans cette longueur d'onde est proportionnelle à sa concentration, ce qui peut être utilisé comme base pour la détermination qualitative et quantitative des protéines, c'est Pourquoi la méthode d'absorption ultraviolette à 280 nm est généralement utilisée pour la surveillance continue de la concentration de protéines dans les systèmes de chromatographie. Mais en raison de la teneur différente en tyrosine et en tryptophane de diverses protéines, pour une quantification précise, il est nécessaire de comparer la protéine pure à tester en tant que norme ou de connaître son coefficient d'extinction en tant que référence. En outre, de nombreuses substances non protéiques ont également une capacité d'absorption constante à la longueur d'onde de 280 nm, qui peut interférer. Parmi eux, les effets sont plus graves, en particulier les acides nucléiques (purines et pyrimidines). L'absorption à 280 nm est 10 fois plus forte (par gramme) que celle des protéines, mais

L'absorption de l'acide nucléique est plus forte à 254 nm et son pic d'absorption se situe autour de 254 nm. Le coefficient d'extinction à 254 nm pour les acides nucléiques est 2 fois plus élevé qu'à 280 nm pour les protéines, alors que l'absorption UV à 280 nm est supérieure à la valeur d'absorption à 254 nm pour les protéines.

Habituellement

Rapport d'absorption de la lumière pour les protéines pures: A280 / a254 "1,8

Rapport d'absorption de la lumière pour les acides nucléiques purs: A280 / a254 0,5

Par conséquent, lorsque des acides nucléiques sont présents simultanément dans la solution protéique (la plupart du temps dans les systèmes biologiques), od254 nm doit être déterminé simultanément, avec od280 nm. Le contenu réel en protéines est ensuite extrapolé à partir du rapport des absorbances des deux longueurs d'onde, corrigé par une formule empirique pour éliminer l'influence des acides nucléiques.

Concentration en protéines = 1,45 × A280 - 0,74 × a254 (mg / ML)

Cette formule empirique a été établie à partir d'une série de données déterminées à partir d'un mélange de protéines (enzymes énolases de levure) et d'acides nucléiques (acides nucléiques de levure) dans des proportions de concentration différentes connues.

Configuration du système